Измерение концентрации фекальной пируваткиназы типа М2 (опухолевой М2-РК) у больных раком желудка, колоректальным раком и аденомой, и у здоровых людей.

Пируваткиназа (РK) играет важную роль в процессе гликолиза. Различные изоформы этого фермента (М2-РK, М1-РK, RPK, LPK) обнаруживаются в разных тканях. Обычная форма пируваткиназы — это тетрамерная молекула, которая обладает высоким сродством к фосфоенолпирувату (PEP). В раковых клетках изоензим М2-РK — тетрамер разъединяется и преимущественно присутствует в димерной форме, которая называется опухолевая М2-пируваткиназа (Tu M2-PK). Гиперпродукция Tu M2-PK наблюдается в различных видах опухолей. Возможно, это связано с особыми метаболическими запросами опухолевых клеток. В результате быстрой пролиферации эти клетки используют укороченный метаболический путь чтобы сохранить энергию для клеточной мультипликации.

Тест на Tu M2-PK для выявления и наблюдения за динамикой опухолей основан на принципе иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител, специфичных к димерной изоформе Tu M2-PK.

В многочисленных исследованиях по количественному определению уровня Tu M2-PK в ЭДТА плазме больных с различными злокачественными новообразованиями были получены многобещающие результаты (1 — 6). В данной работе мы впервые описываем использование копрологического теста для определения Tu M2-PK при гастроинтестинальных опухолях.

Концентрацию Tu M2-PK определяли с помощью диагностического набора фирмы ScheBo ® Biotech AG, Geissen.

К 100 мг каловых масс добавляли 2мл экстаркцинного буфера. После гомогенизирования на вортексе пробы разводили 1:20 и инкубировали на плашке с моноклональными антителами первого типа к Tu M2-PK. После инкубации проб добавляли моноклональные антитела второго типа, конъюгированные с биотином.

Были исследованы образцы кала пациентов следующих групп: 48 здоровых субъектов, 18 пациентов с гастроинтестинальным раком и 8 больных с аденомой.

Характеристика групп больных и результаты представлены в таблице 1.

Заключение: Опухолевую M2-PK можно обнаружить и количественно определить в человеческом кале. При концентрации Tu M2-PK свыше 3 ЕД/мл специфичность теста составила 100% и чувствительность при гастроинтестинальных опухолях в целом — 94,7%. Значительно более высокие концентрации Tu M2-PK были определены в образцах кала пациентов с колоректальным раком по сравнению с больными раком желудка, аденомой и контрольной группой. Таким образом, данный тест представляет наибольший интерес как инструмент для скрининга колоректального рака.

В настоящее время проводятся сравнительные исследования копрологического определения концентрации Tu M2-PK и анализа кала на скрытую кровь.