Из доклада на 6th ECCI, 24 RICAI, Париж, 1-3 дек. 2004 года.

Оценка эффективности экспресс-теста ImmunoCardSTAT!Toxin A&B для диагностики диареи, вызванной Clostridium difficile.
В.Лаланде с соавторами, С.Бонн и М.Моулард, Франция

Результаты: ImmunoCard STAT! Toxin A&B — новый иммунохроматографический тест, который позволяет одновременно определить в кале токсин А и токсин В:

• Процедура исследования проста и занимает 20 минут, не требует дополнительного оборудования и центрифугирования.
• Каждый тест содержит внутренний контроль качества, позволяющий проверить правильность разведений образца и использования реагентов.
• Чувствительность теста по сравнению с ЦТ составляет 88,8 %, что аналогично чувствительности других индивидуальных экспресс-тестов и микропланшетного ИФА.
• Специфичность теста очень высока — 98,5 %.
• Во время вспышки С.difficile-ассоциированной диареи, о которой сообщали Alfa M., Kabani A., Lyerly D. et al. (J.of clin.microbyology (2000) 38: 2706 — 2714), диагностические ошибки (ложноотрицательные результаты) были вызваны определением в кале исключительно токсина А, тогда как возбудителем инфекции являлся штамм С.difficile ToxA- / ToxB+.
• В настоящем исследовании даже в тех 2% случаев, когда токсигенные штаммы С.difficile относились к типу ToxA- / ToxB+, были получены положительные результаты тестов как ЦТ, так и ImmunoCard STAT! Toxin A&B.

Выводы: Для выявления патогенных С.difficile тест ImmunoCard STAT! Toxin A&B может служить достойной альтернативой референсному методу определения цитотоксина в кале:

• Тест проводится просто и быстро (20 минут).
• Тест обладает чувствительностью 88,8 % для токсинов А и В.
• Высокая специфичность 98,5 % достигается повторным тестированием в случае слабоположительного результата.
• Главным преимуществом этого теста является возможность выявлять новые штаммы С.difficile ToxA- / ToxB+.

ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

• Внести 200 мкл раствора для экстракции в пробирку для исследования (используя капельницу на флаконе)
• Добавить в ту же пробирку 3 капли Энзим-конъюгата.
• Добавить 25 мкл кала (или контроля) в приготовленную смесь растворителя с конъюгатом.
• Гомогенизировать полученную смесь на Вортексе (10 сек)
• Инкубировать при комнатной температуре 5 минут.
• Внести по 150 мкл приготовленного гомогенизата в две нижние ЯЧЕЙКИ ДЛЯ ОБРАЗЦОВ на тест-кассете.
• Инкубировать 5 минут при комнатной температуре.
• Внести по 3 капли промывочного буфера в две верхние РЕАГЕНТНЫЕ ЯЧЕЙКИ на той же тест-кассете.
• Дождавшись полной абсорбции, добавить по 3 капли субстрата в те же две верхние РЕАГЕНТНЫЕ ЯЧЕЙКИ.
• Инкубировать при комнатной температуре 5 минут.
• Оценить результат теста в течение 30 секунд по РЕАГЕНТНЫМ (ВЕРХНИМ) ЯЧЕЙКАМ.

Простой и надежный экспресс-тест для определения Токсинов А и В Clostridium difficile в образце кала человека.

Хранение образцов:

Образцы кала пациента, собранные в чистый контейнер, могут храниться до исследования в течение 3 дней в холодильнике при температуре 2-8°С. Если есть необходимость в более длительном хранении, образцы должны быть заморожены при температуре от -20°С до -80°С.

Компоненты набора

Тест-кассеты, флаконы с раствором для экстракции, Энзим-конъюгат, Позитивный контроль, Негативный контроль, Субстрат-реагент, пластиковые пипетки.

Хранение: Набор хранится при температуре 2-8°С.

Интерпретация результатов:

• Положительный результат — появилась синяя окраска в обеих РЕАГЕНТНЫХ (верхних) ЯЧЕЙКАХ (Control+Test).
• Отрицательный результат — синяя окраска появилась только в контрольной РЕАГЕНТНОЙ ЯЧЕЙКЕ (Control).